A las 9,00 horas se dará la salida neutralizada desde Bajo de Guía con el segmento de ciclismo. Los primeros kilómetros se recorrerán transitando en pelotón por las calles de Sanlúcar de Barrameda, para posteriormente realizar una lanzada una vez en carretera, dando comienzo oficialmente a la prueba.

En este segmento los triatletas dispondrán de tres puntos de avituallamiento con agua, bebida isotónica y fruta, situados en los kilómetros 45, 65 y 90.

Tras recorrer 100 kilómetros en bicicleta por la provincia gaditana, atravesando los términos municipales de Jerez, El Puerto de Santa María, Rota, Chipiona y Trebujena, llegarán de nuevo a Sanlúcar los triatletas, para realizar la transición al segmento de natación y preparar la lucha contra las mareas de la desembocadura del Guadalquivir.

Una vez cruzado el río, y en una jornada que puede llegar a ser dura por la previsión que hay de lluvia, en la playa de Malandar se realizará una nueva transición, esta vez al segmento de carrera a pie, que transcurre íntegramente por el Parque Natural de Doñana, en un recorrido de 15 kilómetros de ida y otros tantos de vuelta. Cinco puestos de avituallamiento encontrarán los deportistas en este segmento.

La organización del Desafío Doñana, por el recorrido que se realiza, está muy concienciada con la sostenibilidad ambiental y conservación del Parque Nacional, por lo que, al igual que en años anteriores, se han habilitado las llamadas Eco-Zonas, ubicadas a 75 y a 150 metros de distancia de cada punto de avituallamiento, disponiendo por tanto diez zonas de residuos controlados.

Cada Eco-Zona contará, además de la señalización oportuna para que el deportista pueda identificarla con claridad, con un contenedor donde se alojarán los residuos para su posterior transporte. El deportista estará obligado a depositar allí los residuos, y cualquier residuo arrojado fuera de esta zona acarreará la descalificación del deportista.

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